HL-1小鼠心肌細胞

生長特性：    □ 貼壁   □ 懸浮   □懸浮+貼壁

細胞生長條件：

二．使用方法

按照以下方法進行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，最后放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4、細胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

HL-1小鼠心肌細胞
貼壁細胞接收后的操作流程與注意事項
1.收到細胞當(dāng)天盡快更換新鮮*培養(yǎng)基，第二天再進行消化處理
2.如果細胞收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請將懸浮的細胞即時離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)觀察。同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基，培養(yǎng)觀察
3.若出現(xiàn)生長不均：貼壁細胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長，可將細胞進行消化，重懸打散細胞，加入新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)

貼壁細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請嚴格遵照無菌操作）
1.吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加適量0.25%胰酶進行消化細胞（注意把握消化時間）
2.鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細胞漂?。┤サ粢让?，加6~8ml *培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散
3.取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復(fù)1項作或者凍存